圖1 本實驗設計方案2.2.2 制備果汁的方法選取壹個中等大小的蘋果(約200g左右)洗凈後,不去皮,切成小塊,放入榨汁機中,加入約200mL水,榨取2min,制得蘋果泥。量取壹定體積的蘋果泥,不同條件下處理後,用濾紙進行過濾即可得到果汁。2.2.3 果膠酶活性的檢測指標果膠酶能將果膠分解成小分子物質,小分子物質可以通過濾紙,蘋果汁的體積大小反應了果膠酶催化分解果膠的能力。通過測定濾出的蘋果汁的體積大小作為果膠酶活性的檢測指標。2.2.4 確定果膠酶的最適用量取五支試管,編號後各加入10mL蘋果泥,依次加入水、0.5mL、1mL、2mL、4mL2%的果膠酶溶液,加水使每支試管反應體系的終體積皆為14mL,室溫下作用足夠長時間,過濾15min,量取濾出的蘋果汁的體積,確定果膠酶的最適用量。2.2.5 確定果膠酶的作用時間取六支試管,編號後各加入10mL蘋果泥,壹支加入1mL水作為空白對照,另五支各加入1mL2%的果膠酶溶液,加酶的五支試管依次在室溫下處理1min、5min、10min、15min、20min。處理完用沸水浴使酶失活,過濾15min,量取濾出的蘋果汁的體積,確定果膠酶的作用時間。2.2.6 探究不同溫度對果膠酶活性的影響設定溫度梯度:10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃,取7支試管,編號後各加入10mL蘋果泥,另取7支試管,編號後各加入1mL2%的果膠酶溶液,先將蘋果泥和果膠酶溶液分別在10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃水浴保溫10min,然後將相同溫度處理的蘋果泥和果膠酶溶液混勻後在相應的溫度下再保溫5min,處理完用沸水浴使酶失活,過濾15min,量取濾出的蘋果汁的體積,確定不同溫度對果膠酶活性的影響。若實驗室沒有恒溫水浴鍋,可在水浴的大燒杯加入不同比例的冷水和熱水,用溫度計來控制水浴溫度(不時添加適量熱水維持溫度),當室溫大於10℃時,可用冰塊或冰箱的冷藏室來控制10℃的水浴溫度。2.2.7 探究不同pH值對果膠酶活性的影響設定pH值梯度:2、3、4、5、6、7、8、9,取8支試管,編號後各加入10mL蘋果泥,另取8支試管,編號後各加入1mL2%的果膠酶溶液,用0.1moL/L的HCl溶液和質量分數為1%的NaOH溶液分別將蘋果泥和果膠酶溶液pH值設置成:2、3、4、5、6、7、8、9等八種pH值梯度,用pH試紙或pH計確定pH值,然後將相同pH值的蘋果泥和果膠酶溶液混合,得到八種不同pH值梯度的反應體系,用蒸餾水將八支試管中溶液的體積調成壹致(本實驗反應溶液總體積為16mL),室溫下保溫5min,處理完用沸水浴使酶失活,過濾15min,量取濾出的蘋果汁的體積,確定不同pH值對果膠酶活性的影響。3、實驗結果3.1 完全處理10mL蘋果泥大約需要1mL的2%果膠酶溶液 設置2%果膠酶溶液體積梯度,分別催化相同體積的蘋果泥(10mL),催化後過濾,得到的蘋果汁的體積及澄清度如表Ⅰ所示。 表Ⅰ. 酶量對蘋果汁濾出量的影響試管編號123452%的果膠酶溶液00.5mL1mL2mL4mL過濾後蘋果汁的體積5.4 mL8.5 mL9.3 mL9.5 mL9.5 mL過濾後蘋果汁的澄清度混濁澄清澄清澄清澄清由表Ⅰ和圖2(A)可知,用不同量的果膠酶在室溫下處理10mL蘋果泥足夠長時間,在1~4支試管中,隨著果膠酶量的增加,所得蘋果汁的體積隨之增加,但當2%的果膠酶溶液達到1mL後,繼續增加酶的量,所得蘋果汁的體積幾乎不再增加,說明底物已經耗盡,而處理10mL蘋果泥的果膠酶溶液最適用量應為1mL左右。3.2 室溫下,1mL2%的果膠酶溶液完全處理10mL蘋果泥只需要5~10min 取1mL2%的果膠酶溶液催化相同體積的蘋果泥(10mL),分別作用不同的時間,得到的蘋果汁的體積及澄清度如下表所示。 表Ⅱ. 酶的作用時間對蘋果汁濾出量的影響試管編號123456果膠酶作用時間01min5min10min15min20min過濾後蘋果汁的體積4.5mL5.9 mL7.8 mL8.0 mL8.0 mL8.1 mL過濾後蘋果汁的澄清度混濁澄清澄清澄清澄清澄清由表Ⅱ和圖2(B)可知,在1~4支試管中,隨著果膠酶作用時間的增加,所得蘋果汁的體積隨之增加,但當酶作用時間增加到10min後,繼續增加酶的作用時間,所得蘋果汁的體積幾乎不再增加,說明底物已經耗盡,而當酶作用時間為5min(試管3)時,蘋果汁的體積幾乎到達到最大值,所以1mL2%的果膠酶溶液完全處理10mL蘋果泥大概需要5~10min。