1、四環素抗性中發生buffer和酶切效率，就會導致該質粒難構建，所以該原因是buffer和酶切效率造成的。
2、四環素抗性的內切酶受到甲基化等因素影響時，也是會導致該質粒難構建，所以該原因也是內切酶受到甲基化等因素影響造成的。