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什么是核酸分子杂交

在肿瘤学研究中,为了检测待检基因表达产物的性质和数量,常需要应用序列分子杂交技术。分子杂交技术一般可拆分成多种,一种是窄缝杂交,另一种是窄缝杂交, 一种是印迹杂交。窄缝杂交由于加样最准确及特导性差,现在已很少应用。印迹杂交也分为多种,一种是Southern印迹杂交,用于检测DNA样品;另一种是印迹杂交。 一种是Northern blot杂交,用于检测RNA样品。简单介绍一下这些技术的原理、注意事项及应用。

(1)Southern blot杂交将一定量的DNA样品用于适当的限制性 内切酶切割成不同长度的DNA片段,然后在琼脂糖纤维上进行稀疏分离,如加样量足够,酶解适当,则在用大桥化乙锭染色时,应显示长度及均匀一致的 DNA拖带。短暂后的大众须经碱变性处理,使DNA解离成单链,然后用毛细管吸法或电转移法,使大众上的单链DNA断裂,按大众上相同的位置转移 到纤维素膜或凝固膜,经适当洗涤、凉干后,在80℃中加温2小时,即可用于杂交。用于检测DNA的冠状标志,一般由携带该碎片的细菌组成 标记中的制备。闭合的标记DNA一般用同位素32P或生物素、地高辛配基等标记。杂交前标记必须加温至100℃变性。标记后的膜在暗盒中进行放射自显影 之后,即在一定的位置显示同标记异地结合的阳性DNA条带。So??uthern印迹杂交法可检测癌基因的存在,另外,也可检测抑癌基因的杂合性丢失。

(2)Northern blot杂交 Northern blot杂交的原理与Southern blot杂交基本相同。所处不同,RNA远不如DNA稳定,很容易被RNA酶降解,而RNA酶不仅广泛存在,而且加热 至100℃也不能诱发灭活,所以在操作RNA时所用的一切器皿和溶液都必须经过严格的除去RNA酶的处理。另外,RNA的瞬态必须在含甲醛或乙二醛的变性电解质中 进行。Northern blot杂交主要检测检测癌基因或基他肿瘤相关基因的过度表达,也可检测抑癌基因的低表达或不表达。

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