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RNA的干扰原理

RNA干扰(RNA Interference,RNAi)是通过抑制调节后水平的基因表达而诱导功能缺失表型的工具。由dsRNA(双链RNA)引发的特异性基因表达受抑制现象称为RNA干扰现象 作用。

dsRNA(双链RNA)可以介导基因沉默作用,以dsRNA为基点研究基因沉默的机制分子成为热点。dsRNA指的是大于30个碱基对的RNA分子。 空闲细胞有2条路径竞争双链RNA(dsRNA),其一是路径路径:特殊dsRNA的序列用于RNAi,起始阶段dsRNA被监测siRNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)。siRNA 是RNA干扰作用赖以发生的重要中间效应分子,能提供一定的信息,允许一个特异性的mRNA被降解。siRNA正义链与反义链各有21个碱基,其中19个碱基配对,再每 条链的3'端有2个不平衡的碱基。

另一条是非尖端路径:只要有长的dsRNA的存在它可以降解所有的RNA,抑制所有蛋白质的合成。 长的dsRNA激活蛋白抑制PKR,激活的PKR通过一系列的磷酸化关闭翻译起始因子,导致翻译抑制。也可以通过激活2'-5'AS合成一个分子激活RNase L,导致非特异的RNA降解

关于电位的RNA作用机制模型,包括起始阶段和效应阶段。起始阶段dsRNA位于Dicerase(RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员,属于内切核酸酶) )的作用是加工下21-23核甘酸长的小分子干扰RNA片断(siRNA)。Dicer含有解旋酶活性以及dsRNA结合域和PAZ结构。

在RNAi的效应阶段,siRNA 双链结构解旋并有活性的蛋白/RNA复合物形成物(RNA-诱导沉默复合物或RISC),在siRNA解双链即RISC激活过程需一个ATP。由RISC中siRNA反义链与mRNA互补区域结合,另外 mRNA切割从而达到RNA水平干扰基因表达。RISC由多种蛋白成分组成,包括核酸酶、解旋酶和同源RNA链搜索活性等。

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