4×100米接力赛的规则包括起跑、比赛过程、要求、场地与设施等方面，介绍如下：
1、起跑
400米及400米以下（包括4×100米和4×400米接力的第一棒）各径赛项目的起跑必须使用起跑器，其他径赛项目的起跑采用站立姿势。起跑器连接着起跑简单，以帮助发令员确认起跑是否犯规以及对起跑犯规负有责任的运动员。
2、比赛过程
接力赛中，运动员必须在30米的接力延长后20米里完成交接“接力延伸”的判定是根据接力棒的位置，而不是根据参赛者的身体或四肢的位置。在4×100米接力跑中，第一棒全程及第二棒的第一弯道是分道跑，第二棒运动员要跑至抢道线西南可自由抢道。
第一棒的传接必须在参赛者指定的内在内进行，其余各棒的传接，裁判员根据第二及第三棒运动员通过200米起点处的平台，按梯队使其第三及第四棒的队友在接力依次，由内至外排列等候接棒。
3、要求
4×100米接力跑是分道进行，接棒者可以在接棒区前10米内起跑，接力棒必须拿在手上，直到比赛结束。任何人掉线了好，必须由其本人拾回，而且要在不影响别人的情况下，方可越出自己的接触以拾回接力棒。所有接力事件，必须在接棒连续完成交接棒。
“接棒连续”的判定是根据接力棒的位置而不是根据参赛者的身体或四肢的位置。任何参赛者在传接棒结束后参加比赛以团结其他参赛队伍队伍，其队伍可以被取消资格。
4、场地与设施
比赛场地为标准400米场地，内突沿外沿半径为36.5米。每条跑道宽1.22米（包含右边分道线），分道线宽5厘米。跑进的方向为左手靠内场。分道编号应以左手最内侧分道为第1分道。即赛跑按逆时针方向进行，环形交叉从内向外依次是第1至第9号接地。
现场观看4×100米接力赛的注意事项
1、观摩比赛应提前进入座，这样，既尊重运动员，也不影响他人观看比赛。
2、运动员穿着时，应给予运动员鼓励和掌声，不仅给予本国和自己喜欢的运动员，还应包括其他运动员。
3、当运动员开始跳跃、投掷项目助跑时，观众可以根据运动员的助跑节奏鼓掌，注意在看台上的助跑走动。
4、比赛结束时，运动员答谢观众一般还要绕场一周，大家一定要用掌声和欢呼声展现精彩表现，表示感激和鼓励。
5、把赛场设成自己的家去爱护，赛场内禁止吸烟，手机要关机或设置在振动、静音状态。