1、選擇清潔、幹燥、寬闊的場所進行操作。
2、解開無菌包系帶卷放在包布下邊。
3、用拇指和食指先揭左右兩角，最後揭開內角，註意手不可觸及包布的內面。用無菌鉗（鑷）取出壹塊無菌巾放於治療盤內，剩余部分按原折痕包起紮好，並註明開包時間。
4、鋪無菌盤：
單巾鋪盤：雙手拇、食指捏住治療巾兩上角外面，輕輕抖開，雙折鋪於治療盤上，內面為無菌區，蓋的半幅成扇形折到對面無菌盤上，開口邊向外，放入無菌物品後，邊緣對齊蓋好。將開口處向上翻折兩次，兩側邊緣向下翻壹次，以保持無菌。
雙巾鋪盤：雙手捏住無菌巾的左右兩上角的外面，輕輕抖開，由遠向近鋪於治療盤上，無菌面向上，放入無菌物品。依上法夾取另壹塊無菌巾，由近側向對側覆蓋於治療盤內上，邊緣多余部分反折，不應暴露無菌區。
5、打開無菌容器蓋，必須把蓋的無菌面（內面）向上，放在穩妥處，夾取所需物品放入無菌盤內後立即蓋嚴。
6、倒無菌溶液，仔細檢查核對溶液後，面對瓶簽兩拇指將橡皮塞向上翻轉，再用壹拇、食指將橡皮塞拉出，用食、中指套住橡皮塞，另壹手（或同壹只手）握住瓶簽倒出少許溶液沖凈瓶口，再由原處倒出所需溶液於無菌容器中，套上瓶塞並消毒翻轉部分與瓶頸（從非汙染處到汙染處）後立即蓋好，並註明開瓶時間。
7、打開無菌盤上層無菌巾壹部分，核對無菌手套袋上所註明的手套號碼、滅菌日期和消毒指示膠帶，然後將手套袋攤開，取出滑石粉包，將粉擦於手掌、手背和指間，以壹手掀起手套內袋開口處，另壹手捏住手套翻折部分（手套內面）取出手套，使手套的兩拇指相對，壹手伸入手套內戴好，再以戴好手套的手伸入另壹手套的反折部分，依法戴好另壹手套，將反折部分翻轉套在工作服衣袖外面，揭開無菌盤進行無菌操作。
8、持無菌容器時應托住底部，不可觸及容器內面及邊緣。
9、開包遞送無菌物品時，壹手托起無菌包，另壹手打開無菌包壹角，將帶子卷起夾在托包的手指縫內，另壹手依次打開其它三角並抓住遞送或穩妥地將包內物品放入無菌容器中（無菌區域內）。
10、操作完畢，從手套口翻轉向下脫去手套，整理用物。