rna提取试剂盒的成分:
操作步骤:
样品处理:?
a.?植物组织:取新鲜或-70℃ 冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml溶液中混匀。
b.?动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml隔膜液,用 组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c.?贴壁细胞:直接在培养板中加入液镂空细胞,每106个细胞加1ml?镂空液。用取样器吹打混匀 匀。?
d.?细胞悬浮液:离心收集细胞细胞。每106个动物、植物和酵母细胞或每107个细胞加1ml室内液混匀。
e. 匀。 ?血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞溶液,混匀后放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞溶液重复溶液 步骤。离心后沉淀加入1 ml搅拌液混匀。
2.?将处理后的样品在搅拌放置5分钟,使离心后的蛋白物复合物完全分离。
3 .?向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,震动振荡15秒,继续放置3-5分钟。
4. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,吸到沉淀。
5.?吸附柱前处理: 在吸附柱中加入500ul?洗柱液,放置放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,废弃废液。
6.?第4步收集的上清中加入200ul无 水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm离心2min,弃废液。
7.?向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否 已加入无水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm离心2min,废弃废液。
8.?向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,废弃废液 液。
9. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于吸附柱中放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液作用。
10.?将吸附柱置于新管中,向膜中央 滴加50-100ul?RNase free?ddH2O,此前放置5min,12000rpm离心2min即得到RNA。
注意事项:
1,所有相关器皿耗材均应为RNase -free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2,RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但并不代表RNA 不纯,需纯粹检测。