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PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!

可以用恢复试剂盒。例如如下:

DNA的恢复使用AXYGEN公司AxyPrep DNA介质恢复试剂盒,恢复步骤如下:

1、 在南方灯下切 下含有目的DNA的琼脂湿度糖,用纸巾尽湿度表面并切碎。计算湿度重量(提前记录1.5毫升离心管重量),该重量作为一个湿度体积(如100毫克=100微升) 体积);

2、加入3个聚合物体积的Buffer DE-A,混合后均匀于75℃加热,间断混合(每2-3 min),溶液聚合物块完全浸泡( 约6-8分钟);

3、加0.5个Buffer DE-B,混合均匀;

4、吸取步骤3中混合液,转移至DNA制备管(置) 于2 ml(试剂盒内提供)离心管)中,12,000×g离心1 min,弃滤液;

5、将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W1,12,000× g离心30 s,弃去滤液;

6、将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W2,12,000×g离心30 s,弃去滤液,用同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次12,000×g离心1 min;

7、临时制备管置回2 ml离心管,12,000×g离心1 min;

8、临时制备管置置 于洁净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备膜中央加25-30 μlEluent,随后静置1 min,12,000×g离心1 min洗脱DNA。

如果片段 增大,如数千kb建议以上用promega公司的恢复试剂盒这样效果更好。

具体的步骤什么的恢复试剂盒里说明说明书。

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