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RNA干扰实验,细胞系是不是选的越多越好

RNA干扰实验,细胞系不是选的越多越好

RNA干扰回复实验,主要是为了说明脱靶效应。脱靶效应(脱靶效应)首先由Dharmacon科学家发起 杰克逊和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al.) siRNA 脱靶可诱导毒性表型。 RNA Accepted (2006).)他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/旋转1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下存在大量的基因 siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低,并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同,反映了序列依赖性的脱靶效应。

简单,脱靶效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA,通过microRNA,其可以不受完全实现互补的限制而调节大量靶基因的表达。究竟需要19~23nt 的RNA序列完全互补才能发生干扰作用,而如果进入microRNA途径,只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果,这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默,造成脱靶。 的部分基因,恰好与目的基因位于同一信号污染中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其他基因,亦会造成和目的基因影响干扰后相同的细胞表型改变 而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但并不会造成预期的细胞表改变。

基于以上原因 ,自从脱靶效应发现并被研究者广泛认可后,越来越多的杂志要求研究者在投稿时需要有相应的对照来说明脱靶效应。即您需要有相关的对照或实验 来说明,您所获得的实验结果,不是由于脱靶效应而产生的。

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